将获得的病原菌进行寄主回接，
完成柯赫氏法则的验证。
观察实验室寄主发病症状与田间发病症状是否保持一致，验证发病的寄主中分离的病原菌与接种病原菌是否一致，并记算病原菌的致病力。
具体操作如下：
催芽
：选取饱满的种子，用
55°C
无菌水浸泡种子
2 h
后，把种子放在底部铺有湿润纱布的保湿盒中，置于
28°C
的恒温箱中进行催芽，备用。
菌种培养
：将保存的菌种在
PDA
平板上活化后，
转接至
PD
液体培养基中，放在摇床上
28°C
振荡培养
7 d
，用于菌悬液的制备。
菌悬液的制备
：将在
PD
液体培养基中培养好的菌株用双层纱布过滤除去菌丝，
5000 rpm
离心
10 min
后，弃上清液，取沉淀物加入适量的蒸馏水，再用血球计数板将菌悬液调配成浓度为
1 ×106 mL-1
的孢子悬浮液备用。
接种方法有以下
3
种：
伤根灌根法：
待蔬菜苗长至
2~3
片真叶时，利用灭菌牙签对植株侧根进行损伤，在伤口周围
1 cm
处扎一约
3~4 cm
的小穴，沿小穴灌入
10 mL
的菌悬液，以灌入
10 mL
的无菌水的植株为清水对照。
蘸根接种法
：蔬菜幼苗在一叶一心时，拔出幼苗，洗去泥土，将根部稍加损伤，在接种液中浸泡
15 min
并不断摇晃，最后定植在消毒土中。对照处理用无菌水浸泡根部
15 min
并不断摇晃，最后定植。
胚根浸种法
：种子出芽长
2~3 mm
左右时进行接种，将胚根长度一致的种子置于小烧杯内，注入菌悬液，浸泡
30 min
后倒去菌悬液，立即播种于装有灭菌土的塑料钵内，覆土。对照处理用无菌水浸泡
30 min
后，立即播种，覆土。
试验一般设置
3
次重复，每个重复设
10
个处理。接种后，每天观察植株的长势和发病情况，及时记录并采集症状图像。
待植株发病后，完成柯赫氏法则的验证，确认分离得到的镰孢菌为导致蔬菜根部病害的致病菌。
根据调查结果分析病害的发病程度并计算病情指数，病害评估标
准和病情指数公式
2-1
如下：
0
级：无病症
1
级：真叶或子叶上出现轻微萎蔫，但生长正常
2
级：
真叶或子叶上出现明显的坏死斑，
根部出现病变，生长受到一定影响
3
级：
根部坏死引起局部性萎蔫，或生长僵化
4
级：
整体萎蔫，
倒伏枯死，根部严重病变
病情指数
=[∑(
各级病株数
×
相对级数值
)/(
总株数
×
最高级数代表值
)]×100